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抗體制備方法

 更新時(shí)間:2019-05-29 點(diǎn)擊量:1245
   抗體制備方法
 
  制備出效價(jià)高,特異性強(qiáng),穩(wěn)定性好的抗體是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)取得成功的基礎(chǔ),抗體質(zhì)量的好壞直接影響著研究者研究的成敗,不同的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)方法(如ELISA,IHC,IP,ICC,SDS-PAGE,WB等)對(duì)抗體的效價(jià),濃度和純度有不同的要求。我們知道,一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體,血清蛋白以及其他各種雜蛋白等,在制備特異性抗體過(guò)程中當(dāng)抗體的效價(jià)達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期之后,我們所制備的抗體的純度關(guān)鍵取決于所選擇的純化方法。下面就一一介紹常用抗體純化方法及其相關(guān)原理。
 
  沉淀法
 
  硫酸銨/辛酸沉淀法是純化抗體傳統(tǒng)的方法之一,被廣泛用于血清和腹水抗體的濃縮和粗純,此方法可大規(guī)模粗純抗體,但純化后純度不高,還需配合其它方法繼續(xù)純化。通常是將飽和硫酸加入血清或腹水中,將抗體沉淀下來(lái),然后在溶解沉淀繼續(xù)下一步的純化。辛酸沉淀抗體通常要先將腹水或血清的pH調(diào)4.8,然后緩慢的滴加辛酸,是蛋白沉淀,抗體在上清中,上清繼續(xù)下一步的純化。
 
  離子交換層析
 
  離子交換層析也常用于抗體的純化,通量大,工業(yè)上用離子交換層析成本低,主要用于除去非抗體蛋白,及用親和層析純化時(shí)混入的Protein A/G等親和填料脫離的配基,內(nèi)毒素的去除等。離子交換純化時(shí),根據(jù)抗體的pI選擇合適的離子交換類型,在pI未知時(shí)可以分別用陰陽(yáng)離子交換填料去試驗(yàn)。
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